人类白细胞抗原（HLA）基因分型检测试剂注册审查要点

人类白细胞抗原（HLA）基因分型检测试剂，第三类体外诊断试剂。基于核酸检测技术定性检测人静脉全血样本中HLA基因。适用方法学：聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸杂交（PCR-SSO）方法、荧光熔解曲线法、荧光PCR法、高通量测序法。临床预期用途分两类：低/中分辨率分型用于肝/肾等实体器官移植供受者选择参考；高分辨率分型用于造血干细胞移植配型或肝/肾等实体器官移植供受者选择参考。低分辨率与中分辨率定义与《人类白细胞抗原基因分型方法分辨水平的专家共识》一致，高分辨率包括共识中高分辨率和部分超高分辨率（可完全确定第二个域数字），不包括可检测到第三个域的超高分辨率和第四个域的等位基因分辨率。不包括直接测序法（SBT）、聚合酶链反应-序列特异性引物（PCR-SSP）方法（可参考本指导原则，需验证替代方法科学合理性）。

依据《体外诊断试剂注册与备案管理办法》（总局令第48号）、《体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式》（2021年第122号）。性能指标参考WS/T 785-2021《人类白细胞抗原基因分型检测体系技术标准》，设置准确度、重复性、有效检测范围，重复性检验样本浓度为上样要求的最低DNA浓度。三个不同生产批次检验报告，已有国家标准品发布。

准确度研究采用盲法，编盲表和盲态保持情况。对比方法：已上市同等分辨率或更高分辨率产品，或中华骨髓库合作实验室使用的高分辨率检测方法，或IHIW参考盘、UCLA参考盘。样本包含中国人群所有常见等位基因（Common alleles）和部分确认等位基因（Well-documented alleles），参考现行版《中国常见及确认的HLA等位基因表（CWD）》，纳入罕见等位基因（Rare alleles），包含部分杂合子样本。每个样本仅检测一次，不可重复检测。接受标准：低/中分辨率产品血清型（等位基因第一个域）与对比方法一致；高分辨率产品等位基因与对比方法相同。

精密度研究样本包括CWD表所有常见等位基因及一定数量杂合子，浓度至少包括上样最低DNA浓度。样本编盲。组合研究总体时长不少于20天，至少3个不同实验室，每个实验室两名操作人员（不同实验室操作人员不同且熟练程度不同），至少3个试剂批次，每个批次和每种适用仪器在不连续5天中使用。每个样本至少15+X次检测结果。

干扰试验：血红蛋白、甘油三酯、胆红素、白蛋白、常见治疗用药物，潜在最大浓度条件下评价。交叉反应：与靶基因序列相近或具同源性的其他HLA基因座。核酸提取/纯化性能：全血真实样本提取纯度、浓度、完整度、提取效率，配合检测试剂的准确度、精密度、抗干扰研究。

主要原材料：引物、探针、酶（连接酶、聚合酶、限制性内切酶、DNA聚合酶）、dNTP、接头、标签、核酸分离/纯化组分、质控品、参考品。引物探针设计基于HLA等位基因序列数据库多重比对，与人类基因非目标区域和常见入血病原体基因同源比对。阳性质控品含代表性等位基因，设置空白质控品控制交叉污染。企业参考品库覆盖所有Common等位基因、部分WD等位基因、Rare等位基因。

临床试验至少3家备案机构。对比方法：境内已批准上市高分辨试剂或实验室参考方法（一代测序、二代测序、组特异性测序引物检测）。受试者：实体器官移植预期用于供受者及潜在供者；造血干细胞移植预期用于供受者及潜在供者。样本类型静脉全血，纳入临床原始样本。总样本量不低于1500例。频率≥0.9%的常见亚型每种不少于15例，频率<0.9%的常见型原则上均有纳入。包含A、B、C、DRB1、DQB1基因的高分辨率产品确认型别及罕见型别覆盖不少于90种。高分辨率产品基因亚型结果总符合率95%置信区间下限≥99.7%，低分辨率产品第一区域结果总符合率95%置信区间下限≥99.7%。

说明书预期用途明确检测基因座及分辨率、具体临床用途（造血干细胞移植或具体器官移植）。明确无法准确分型的等位基因。明确针对中国人群常见等位基因和部分WD等位基因已验证，其他未验证基因型别可能存在无法检出或检出错误。低/中分辨率产品说明书附件列表明确孔位布局图、阳性判断值、结果判读表。

参考文献：《医疗器械监督管理条例》（国务院令第739号）、《体外诊断试剂注册与备案管理办法》（总局令第48号）、《体外诊断试剂临床试验技术指导原则》（2021年第72号）、WS/T 785-2021、《人类白细胞抗原基因分型技术平台规范化建设及临床应用专家共识》、《人类白细胞抗原基因分型方法分辨水平的专家共识》、《中国造血干细胞捐献者资料库HLA基因分型数据入库标准（2023版）》。